Ágar Mueller Hinton (M173)

Recomendado para determinação da suscetibilidade de microrganismos a agentes

antimicrobianos isolados de amostras clínicas.

Composição**

Ingredientes Gms / Litro

Infusão HM B de # 300.000

Acicase ## 17.500

Amido 1.500

Ágar 17.000

PH final (a 25 ° C) 7,3 ± 0,1

** Fórmula ajustada, padronizada para atender aos parâmetros de desempenho.

# - Equivalente à infusão de carne bovina de

## - Equivalente ao hidrolisado de caseína ácida

Instruções

Suspenda 38,0 gramas em 1000 ml de água destilada. Aqueça até ferver para dissolver

completamente o meio. Esterilize em autoclave a pressão de 15 libras (121 ° C) por 15 minutos.

Arrefecer até 45-50 ° C. Misture bem e despeje em placas de Petri estéreis.

Nota: O desempenho deste lote foi testado e padronizado de acordo com os protocolos M6 do

documento CLSI (anteriormente, NCCLS) atual para avaliação do ágar Mueller Hinton

desidratado.

Princípio e Interpretação

A formulação de Mueller Hinton foi originalmente desenvolvida como um meio de ágar simples e

transparente para o cultivo de espécies patogênicas de Neisseria. Outros meios foram

desenvolvidos posteriormente, substituindo o uso do ágar Mueller Hinton no cultivo de espécies

patogênicas de Neisseria, mas se tornou amplamente utilizado na determinação da resistência

às sulfonamidas dos gonococos e outros organismos. O ágar Mueller Hinton agora é usado

como meio de teste para testes de susceptibilidade a antimicrobianos. Mueller Hinton Agar

recomendado para a difusão de agentes antimicrobianos impregnados em disco de papel

através de um gel de agar tal como descrito em CLSI Approved Standard. O Mueller Hinton Agar

foi selecionado pelo CLSI por vários motivos:

Eu. Demonstra boa reprodutibilidade de lote para lote para testes suscetíveis.

1. É pobre em inibidores de sulfonamida, trimetoprim e tetraciclina.

iii. Apoia o crescimento da maioria dos patógenos bacterianos não exigentes e

1. Muitos dados e muita experiência em relação ao seu desempenho foram registrados.

Kirby-Bauer et al recomendaram este meio para a realização de testes de suscetibilidade a

antibióticos usando um único disco de alta concentração. O Comitê de Padronização da OMS

para a padronização dos testes de suscetibilidade aceitou o ágar Mueller Hinton para determinar

a suscetibilidade dos microrganismos devido à sua reprodutibilidade. O ágar Mueller Hinton com

5% de sangue de ovelha e o ágar Mueller Hinton com hemoglobina foram recomendados para

testes de sensibilidade a antimicrobianos de Streptococcus pneumoniae e Haemophilus

influenzae.

A infusão de HM B e a acicase fornecem compostos nitrogenados, carbono, enxofre e outros

nutrientes essenciais. O amido atua como um colóide protetor contra substâncias tóxicas

presentes no meio. A hidrólise do amido produz dextrose, que serve como fonte de energia.

Estes ingredientes são selecionados para um baixo teor de timina e timidina, conforme

determinado pelos valores de MIC para Enterococcus faecalis com sulfametoxazoletrimetoprim

(SXT).O procedimento de Kirby-Bauer baseia-se na difusão em ágar de substâncias

antimicrobianas impregnadas em discos de papel. Este método emprega discos com uma única

concentração de agente antimicrobiano e os diâmetros de zona observados estão

correlacionados com os valores de concentração inibitória mínima (CIM). Uma suspensão

padronizada do organismo é esfregada em toda a superfície do meio. Os discos de papel

impregnados com quantidades específicas de agentes antimicrobianos são então colocados na

superfície do meio, incubados e as zonas de inibição ao redor de cada disco são medidas. A

suscetibilidade é determinada pela comparação com os padrões CLSI.

Os vários fatores que influenciam os testes de suscetibilidade à difusão de disco são

profundidade do ágar, potência do disco, concentração do inóculo, pH do meio e produção de

beta-lactamase pelos organismos testados. O Ágar Mueller Hinton não é apropriado para o

ensaio pelo método de difusão em disco com organismos de crescimento lento, anaeróbios e

capnófilos. Com organismos de crescimento lento, o aumento da incubação pode causar

deterioração do antibiótico difuso e produzir leituras imprecisas.

Tipo de amostra

Amostras clínicas: culturas puras isoladas da urina, fezes, sangue etc.

Coleta e manuseio de amostras

Para amostras clínicas, siga as técnicas apropriadas para o manuseio das amostras, de acordo

com as diretrizes estabelecidas.

Aviso e Precauções

Leia o rótulo antes de abrir o recipiente. Use luvas de proteção / roupas de proteção / proteção

para os olhos / proteção para o rosto. Siga as boas práticas de laboratório microbiológico ao

manusear amostras e cultura. As precauções padrão, de acordo com as diretrizes

estabelecidas, devem ser seguidas durante o manuseio de amostras clínicas. As diretrizes de

segurança podem ser consultadas em folhas de dados de segurança individuais.

Limitações

Este meio é recomendado apenas para testes de suscetibilidade de culturas puras.

A densidade do inóculo pode afetar o tamanho da zona. Inóculo pesado pode resultar em zonas

menores ou menos inóculo pode resultar em zonas maiores.

Organismos exigentes podem não crescer neste meio e podem exigir suplementação de sangue.

Anaróbios exigentes podem não crescer neste meio.

Como a suscetibilidade antimicrobiana é realizada com o disco antibiótico, é desejável o

armazenamento adequado do disco, o que pode afetar a potência do disco.

Sob certas circunstâncias, os resultados in vitro da suscetibilidade a antibióticos podem não

mostrar os mesmos in vivo.

Desempenho e Avaliação

A performance do meio é esperada quando usada de acordo com a direção na etiqueta dentro

do prazo de validade, quando armazenada na temperatura recomendada.

Controle de qualidade

Aparência: Creme para amarelar pó homogêneo de fluxo livre

Gelificação: Firme, comparável com gel de ágar a 1,7%.

Cor e clareza do meio preparado: Gel de cor âmbar claro, claro a leve opalescente proveniente

de placas de Petri.

Reação: Reação de solução aquosa a 3,8% p / v a 25 ° C. pH: 7,4 ± 0,1

pH: 7,20-7,50

Resposta cultural: Características culturais observadas após incubação a 30-35 ° C por 18 a 24

horas para culturas bacterianas. Para teste de S.pneumoniae: O meio foi suplementado com 5%

de sangue de ovelha e incubado a 35 ° C por 16-18 horas a 5% de CO2. Para teste de

H.influenaze: O meio foi suplementado com 5g / l de extrato de levedura e 2 frascos para

injetáveis. / l de crescimento de Haemophilus Suplemento (FD117 contendo 15 mg / l de hematina

+ 15 mg / l de NAD) e incubado a 35 ° C por 20-24 horas a 5% de CO2. Teste de sensibilidade a

antibióticos Vários discos foram testados para cepas padrão de ATCC e a zona de inibição foi

medida após uma incubação a 30-35 ° C por 18 horas. (Conforme o mais recente protocolo M6 e

normas CLSI conforme o atual CLSI M100) Conteúdo de timina / timidina

# As zonas desses discos são indicativas do conteúdo de timina / timidina do meio.

Conteúdo de cátions divalentes

$ As zonas para esses discos são indicativas do conteúdo de cátions divalentes do meio.

Resposta cultural

Organismo:Escherichia coli ATCC 25922 (00013*)

Crescimento: Exuberante

AT