O Ágar Base Sangue é recomendado como uma base à qual o sangue pode ser adicionado

para uso no isolamento e cultivo de microorganismos patogênicos exigentes como Neisseria,

Streptococcus, etc.

Composição**

Ingredientes Gms / Litro

HM peptona B # 10.000

Triptose 10.000

Cloreto de sódio 5.000

Ágar 15.000

PH final (a 25°C) 7,3 ± 0,2

** Fórmula ajustada, padronizada para atender aos parâmetros de desempenho

# Equivalente à peptona do coração bovino

Instruções

Suspenda 40,0 gramas em 1000 ml de água purificada / destilada. Aqueça até ferver para

dissolver completamente o meio. Esterilizar por autoclavagem a 15 libras de pressão (121°C)

por 15 minutos. Arrefecer a 45-50°C e adicionar assepticamente sangue desfibrinado estéril a

5% v/v. Misture bem e despeje em placas de Petri estéreis.

Princípio e Interpretação

O Ágar Base Sangue é um meio altamente nutritivo geralmente usado como meio basal para a

preparação de ágar-sangue por suplementação com sangue. Também pode ser usado como

meio de uso geral sem a adição de sangue.

Os meios de base de ágar-sangue podem ser utilizados com adição de fosfato de fenolftaleína

(7) para a detecção de produção de fosfato Estafilococos, com adição de sal e ágar para

avaliação da contaminação da superfície de equipamentos e carcaça de suíno (2) e determinar

a faixa de salinidade das Flavobactérias marinhas (3). Também pode ser usado para a

preparação de antígenos de Salmonella Typhi (9).

A base de ágar-sangue é recomendada pela APHA (8) e métodos padrão (11, 1) para o teste de

amostras de alimentos. A peptona B e a triptose HM fornecem carbono, nitrogênio, aminoácidos

e vitaminas. O cloreto de sódio ajuda a manter a equilíbrio osmótico do meio. A adição de sangue

torna o meio mais nutritivo, proporcionando crescimento adicional fatores exigidos pelos

organismos exigentes. Também ajuda na visualização das reações hemolíticas. No entanto,

reações hemolíticas dependem do sangue animal usado. O sangue de ovelha fornece melhores

resultados para os estreptococos do grupo A (10). Mas o sangue de ovelha não consegue

apoiar o crescimento de Haemophilus haemolyticus, uma vez que o sangue de ovelha é

deficiente em nucleotídeos de piridina. No entanto, quando cavalo o sangue é usado colônias de

1. haemolyticus produzem hemólise e imitam Streptococcus pyogenes (6).

Tipo de amostra

Material clínico: sangue e outro material patológico; amostras de alimentos.

Coleta e manuseio de amostras

Para amostras clínicas, siga as técnicas apropriadas para o manuseio das amostras, de acordo

com as diretrizes estabelecidas (4,5).

Para amostras de alimentos, siga as técnicas apropriadas para coleta e processamento de

amostras, de acordo com as diretrizes (8).

Após o uso, os materiais contaminados devem ser esterilizados em autoclave antes de serem

descartados.

Aviso e Precauções

Apenas para diagnóstico in vitro. Leia o rótulo antes de abrir o recipiente. Usar luvas de

proteção/de proteção vestuário/proteção ocular/proteção facial. Siga as boas práticas de

laboratório microbiológico ao manusear amostras e cultura.

As precauções padrão, de acordo com as diretrizes estabelecidas, devem ser seguidas

durante o manuseio de amostras clínicas. Orientações de segurança podem ser consultados

em fichas de dados de segurança individuais.

Limitações

1. Recomenda-se a adição de sangue de ovelha para detectar hemólise. Este meio não suporta

o crescimento de H.haemolyticus.

2. A adição de sangue de cavalo ou de coelho ao meio base suporta o crescimento de

H.haemolyticus, mas se assemelha a beta-hemolítica Estreptococos e, portanto, devem ser

confirmados.

3. O padrão hemolítico varia de acordo com a fonte de sangue utilizada.

Desempenho e Avaliação

O desempenho do meio é esperado quando usado de acordo com a direção na etiqueta dentro

do prazo de validade quando armazenado à temperatura recomendada.

Controle de qualidade

Aparência: Creme para amarelar pó homogêneo de fluxo livre

Gelificação: Firme, comparável com gel de ágar a 1,5%

Cor e clareza do meio preparado: Meio basal: gel de cor âmbar clara, clara a ligeiramente

opalescente. Após adição de 5% v / v de sangue desfibrinado estéril: Formas de gel opaco de

cor vermelho cereja em placas de Petri.

Reação: Reação de solução aquosa a 4,0% p/v a 25°C. pH: 7,3 ± 0,2

pH: 7,10-7,50

Resposta cultural

Características culturais observadas com adição de sangue desfibrinado estéril a 5% p/v, após

uma incubação a 35-37°C por 18-48 horas.

Resposta cultural

Organismo:Neisseria meningitidis ATCC 13090

Inoculação:50-100

Crescimento sem Sangue:Justo

Recuperação sem Sangue: 40-50%

Crescimento com Sangue:Exuberante

Recuperação com Sangue:>=70%

Hemólise: Nenhum

Organismo: Staphylococcus aureus subsp. aureus ATCC 25923 (00034*)

Inoculação:50-100

Crescimento sem Sangue:Bom

Recuperação sem Sangue:50-70%

Crescimento com Sangue:Exuberante

Recuperação com Sangue:>=70%

Hemólise: Beta

Organismo: Staphylococcus epidermidis ATCC 12228 (00036*)

Inoculação:50-100

Crescimento sem Sangue:Bom

Recuperação sem Sangue:50-70%

Crescimento com Sangue:Exuberante

Recuperação com Sangue:>=70%

Hemólise: Nenhum

Organismo: Streptococcus pneumoniae ATCC 6303

Inoculação:50-100

Crescimento sem Sangue:Justo-Bom

Recuperação sem Sangue:40-50%

Crescimento com Sangue:Exuberante

Recuperação com Sangue:>=70%

Hemólise: Alpha

Organismo: Streptococcus pyogenes ATCC 19615

Inoculação:50-100

Crescimento sem Sangue:Justo-Bom

Recuperação sem Sangue:40-50%

Crescimento com Sangue:Exuberante

Recuperação com Sangue:>=70%

Hemólise: Beta

Armazenamento e prazo de validade

Armazenar entre 10-30°C em um recipiente bem fechado e o meio preparado a 2-8°C. Use antes

da data de validade no rótulo.

Na abertura, o produto deve ser adequadamente armazenado seco, após fechar bem o frasco,

a fim de evitar a formação de grumos devido a natureza higroscópica do produto. O

armazenamento inadequado do produto pode levar à formação de caroços. Armazenar em local

ventilado a seco área protegida de temperaturas extremas e fontes de ignição. Selar o

recipiente firmemente após o uso.