AG-6018 - O Caldo Selenito Cistina é recomendado como meio de enriquecimento para isolamento de Salmonellae de alimentos, laticínios, materiais sanitários importância e amostras clínicas.

Composição**
Ingredientes Gms / Litro
Parte A -
Tryptone 5.000
Lactose 4.000
Fosfato de sódio 10.000
L-cistina 0,010
Parte B -
Selenito de hidrogênio do sódio 4.000
PH final (a 25 ° C) 7,0 ± 0,2
** Fórmula ajustada, padronizada para atender aos parâmetros de desempenho

Instruções

Suspenda 4,0 gramas da Parte B em 1000 ml de água destilada. Adicione 19,01 gramas da parte A. Misture bem. Quente para dissolver o meio completamente. Distribua em tubos de ensaio estéreis. Esterilize em um banho de água fervente ou vapor livre por 10 minutos. NÃO AUTOCLAVE. Aquecimento excessivo é prejudicial. Descarte o meio preparado se uma grande quantidade de selenito for reduzida (indicado por precipitado vermelho no fundo do tubo / garrafa). Nota: Em vez da parte B, discos DD056-Biselenito de sódio (1 disco por 10 ml do meio) ou DB001-Biselenito de sódio. O botão (1 botão por 100 ml de meio) pode ser adicionado ao meio após a fervura.

Princípio e Interpretação
Os efeitos inibitórios seletivos do selenito foram demonstrados pela primeira vez por Klett (7). Guth (4) usou-o para isolar Salmonella Typhi. Leifson estudou selenito e formulou um meio usando selenito. O Selenite Fluid Cystine Medium é uma modificação da fórmula de Leifsons (8) com a adição de cistina (10). A formulação corresponde à recomendada pela AOAC (3) para a detecção de Salmonella em gêneros alimentícios, particularmente ovoprodutos. Também é recomendado pela APHA (11,13) e USP (12).
O caldo de selenito e cistina é útil para detectar Salmonella nos estágios não agudos da doença, quando ocorrem organismos no fezes em baixo número e para estudos epidemiológicos para melhorar a detecção de baixo número de organismos de pacientes assintomáticos ou convalescentes (9). As salmonelas também são feridas durante vários procedimentos de processamento de alimentos, incluindo exposição a baixas temperaturas, calor sub marginal, secagem, radiação, conservantes ou desinfetantes. Recuperação de Salmonella envolve pré-enriquecimento, enriquecimento seletivo e revestimento seletivo, uma vez que Salmonella pode estar presente em baixos números nos alimentos amostra em condições de lesão. O meio fluido de selenita cistina é usado como meio de enriquecimento seletivo para o cultivo de espécies de Salmonella. Este meio é formulado para permitir a proliferação de Salmonella enquanto inibe o crescimento de organismos não-Salmonella concorrentes.
O triptone fornece substâncias nitrogenadas. A lactose é o carboidrato fermentável e mantém o pH no meio como o selenito é reduzido pelo crescimento bacteriano e o álcali é produzido. Um aumento no pH diminui a toxicidade do selenito e resulta em no crescimento excessivo de outras bactérias. O ácido produzido pelas bactérias devido à fermentação da lactose serve para manter um pH neutro.
O fosfato mantém um pH estável e também diminui a toxicidade do selenito. A L-cistina é o agente redutor, melhorando a recuperação de Salmonella. O caldo enriquecido é subcultivado em meio sólido. Não incube o caldo por mais de 24 horas, pois o efeito inibitório do selenito reduz após 6 a 12 horas de incubação (2).
Inocule a amostra de alimentos no caldo de pré-enriquecimento recomendado e transfira 1 ml de mistura para 10 ml de Fluid Selenito Cistina Médio e também para 10 ml de Caldo de Tetrationato (M032). Incubar e subcultura subsequente em Bismuto Agar Sulfito (M027), Agar Xilose-Lisina-Desoxicolato (M031), Agar Entérico Hektoen (M467) ou Agar MacConkey (M081).

Tipo de amostra
Amostras clínicas - fezes; Amostras de alimentos e laticínios.

Coleta e manuseio de amostras:
Para amostras clínicas, siga as técnicas apropriadas para o manuseio das amostras, de acordo com as diretrizes estabelecidas (5,6).
Para amostras de alimentos e laticínios, siga as técnicas apropriadas para coleta e processamento de amostras, conforme diretrizes (1,11,13).
Após o uso, os materiais contaminados devem ser esterilizados em autoclave antes de serem descartados.

Aviso e precauções:
Diagnóstico in vitro. Use apenas. Leia o rótulo antes de abrir o recipiente. Use luvas de proteção / roupas de proteção / proteção para os olhos / proteção para o rosto. Siga as boas práticas de laboratório microbiológico ao manusear amostras e cultura.
As precauções padrão, de acordo com as diretrizes estabelecidas, devem ser seguidas ao manusear amostras clínicas. Segurança diretrizes podem ser consultadas em folhas de dados de segurança individuais.

Limitações:
1.Alguns organismos podem apresentar crescimento deficiente devido a necessidades nutricionais variáveis.

Controle de qualidade
Aparência: Parte A: Creme para amarelar pó homogêneo de fluxo livre. Parte B: Pó de fluxo livre homogêneo, branco a creme
Cor e clareza do meio preparado: Solução de cor amarela clara, clara a ligeiramente opalescente de meio completo
Reação: Reação do meio [(1,9% p/v) Parte A e (0,4% p/v) Parte B] a 25°C. pH: 7,0 ± 0,2
pH: 6,80-7,20

Resposta cultural
M025: Características culturais observadas após uma incubação a 35-37°C por 18-24 horas quando subcultivadas em ágar XLD (M031).

Organismo: Salmonella Choleraesuis ATCC 12011
Inoculação: 50-100
Recuperação: Exuberante
Cor da Colônia: Vermelho com preto no centro

Organismo: Salmonella Typhimurium ATCC 14028 (00031*)
Inoculação: 50-100
Recuperação: Exuberante
Cor da Colônia: Vermelho com preto no centro

Organismo: Salmonella Typhi ATCC 6539
Inoculação: 50-100
Recuperação: Exuberante
Cor da Colônia: Vermelho com preto no centro

Organismo: Salmonella Enteritidis ATCC 13076
Inoculação: 50-100
Recuperação: Exuberante
Cor da Colônia: Vermelho

Organismo: Pseudomonas aerugionosa ATCC 27853 (00025*)
Inoculação: 50-100
Recuperação: Exuberante
Cor da Colônia: Amarelo

Organismo: Escherichia coli ATCC 8739 (00012*)
Inoculação: 50-100
Recuperação: Pouco-nenhum (sem aumento de números)
Cor da Colônia: Amarelo

Organismo: Escherichia coli ATCC 25922 (00013*)
Inoculação: 50-100
Recuperação: Pouco-nenhum (sem aumento de números)
Cor da Colônia: -

Organismo: Escherichia coli ATCC 8739 (00012*)
Inoculação: 50-100
Recuperação: Pouco-nenhum (sem aumento de números)
Cor da Colônia: -

Organismo: Escherichia coli ATCC 25922 (00013*)
Inoculação: 50-100
Recuperação: Pouco-nenhum (sem aumento de números)
Cor da Colônia: -

Organismo: Enterococcus faecalis ATCC 29212 (00087*)
Inoculação: >=10³
Recuperação: Inibido
Cor da Colônia: -

Armazenamento e prazo de validade
Armazenar entre 10-30°C em um recipiente bem fechado e o meio preparado a 2-8°C. Use antes da data de validade no rótulo. Na abertura, o produto deve ser adequadamente armazenado seco, depois de fechar bem o frasco para evitar grumos formação devido à natureza higroscópica do produto. O armazenamento inadequado do produto pode levar à formação de caroços.
Armazenar em área ventilada e seca, protegida de temperaturas extremas e fontes de ignição. Fechar bem o recipiente depois de usar. Use antes da data de validade no rótulo.
O desempenho do produto é melhor se usado dentro do prazo de validade indicado.

Descarte:
O usuário deve garantir o descarte seguro por autoclave e / ou incineração de preparações usadas ou não utilizáveis deste produto. Segue procedimentos laboratoriais estabelecidos na eliminação de materiais infecciosos e materiais que entram em contato com a amostra deve ser descontaminada e descartada de acordo com as técnicas laboratoriais atuais (5,6).

Referências:
1. American Public Health Association, Métodos Padrão para o Exame de Produtos Lácteos, 1978, 14ª Ed., Washington DC.
2. Chattopadhyay W. e Pilford J. N., 1976, Med. Lab. Sei., 33: 191.11. Hartman P. A. e S. A., Munich, 1981, J. Food Pract., 44: 385-386.
3. Manual Analítico Bacteriológico da FDA, 2005, 18ª Ed., AOAC, Washington, DC.
4. Guth F., 1916, Zbl. Bakt. I. Orig. 77: 487.
5.Isenberg, H.D. Manual de Procedimentos de Microbiologia Clínica. 2ª Edição.
6. Jorgensen, J. H., Pfaller, M.A., Carroll, K.C., Funke, G., Landry, M. L., Richter, S. S. e Warnock., D.W. (2015) Manual de Microbiologia Clínica, 11ª Edição. Vol. 1
7. Klett A., 1900, Zeitsch Fer Hyg. Und. Infekt., 33: 137.
8. Leifson E., 1936, Am. J. Hyg., 24 (2): 423.
9. Murray P. R., Barão E. J., Jorgensen J. H., Pfaller M. A., Yolken R. H., (Eds.), 8ª Ed., 2003, Manual of Clinical Microbiology, ASM, Washington, DC.