ÁGAR CROMOGÊNICO BACILLUS (M1651)USO PRETENDIDO É recomendado para isolamento e diferenciação entre várias espécies de Bacillus de uma cultura mista em alimentos, amostras clínicas e não clínicas pelo método cromogênico.COMPOSIÇÃO Ingredientes (g/L)Peptona: 10,000 HM Extrato#: 1,000 D-Manitol: 10,000Cloreto de sódio: 10,000 Mistura cromogênica: 3,200Vermelho de fenol: 0,025Ágar: 15,000 pH Final (a 25°C): 7.1 ±0.2**Fórmula ajustada, padronizada para atender aos parâmetros de desempenho# Equivalente a extrato de carneINSTRUÇÕES Suspender 49,22g em 1000mL de água destilada. Aqueça até a ebulição para dissolver o meio completamente. Esterilizar em autoclave a 15 lbs de pressão (121ºC) por 15 minutos. Resfrie a 50°C e adicione assepticamente o conteúdo reidratado de 1 frasco de Suplemento seletivo Polimixina B (FD003) se desejado. Misture bem e despeje em placas de Petri estéreis.PRINCIPIO E INTERPRETAÇÃO A maioria das espécies de Bacillus aparentemente tem pouco ou nenhum potencial patogênico e raramente está associada a doenças em humanos ou animais inferiores. A principal exceção a isso são Bacillus anthracis, o agente do antraz, e Bacillus cereus, mas várias outras espécies, particularmente aquelas do grupo B.subtilis, foram implicadas em intoxicação alimentar e outras infecções humanas e animais (1).Bacillus cereus causa intoxicação alimentar devido ao consumo de arroz contaminado (3, 4, 5), outros alimentos ricos em amido, como batata, macarrão e queijo, também foram implicados, infecções oculares e uma ampla gama de outras condições clínicas, como formação de abscesso, meningite, septicemia e infecção de feridas.Ágar Cromogênico Bacillus é baseado na formulação de Ágar MYP formulado por Mossel et. al.,(2) usado para enumeração de Bacillus cereus e Bacillusthuringiensis quando presentes em grande número em certos alimentos.O meio contém peptona e extrato HM, que fornecem compostos nitrogenados. O manitol serve como carboidrato fermentável, cuja fermentação pode serdetectada pelo vermelho de fenol. Organismos fermentadores de manitol, como B. megaterium, produzem colônias de cor amarela. A mistura cromogênicapresente no meio é clivada pela enzima beta-glucosidase encontrada em B. cereus resultando na formação de colônias azuis. B.thuringiensis também crescecomo colônias azuis/verdes neste meio, pois B.cereus e B.thuringiensis são bioquimicamente idênticos, porém B.cereus mostra colônias planas com centrosazuis distintos, enquanto B.thuringiensis mostra margens irregulares. Se for necessário o isolamento seletivo de B.cereus ou B.thuringiensis , adicioneassepticamente polimixina B (FD003).TIPO DE AMOSTRA Amostras clínicas: Sangue;Amostras de alimentos e laticíniosCOLETA E MANUSEIO DE AMOSTRAS Para amostras clínicas, siga as técnicas apropriadas para manusear amostras de acordo com as diretrizes estabelecidas (6,7).Para amostras de alimentos e laticínios, siga as técnicas apropriadas para coleta e processamento de amostras de acordo com as diretrizes (8,9,10).Após o uso, os materiais contaminados devem ser esterilizados em autoclave antes de serem descartados.AVISOS E PRECAUÇÕES Uso para diagnóstico in vitro. Leia o rótulo antes de abrir o recipiente. Use luvas de proteção/ vestuário de proteção/ proteção ocular/ proteção facial. Siga as boas práticas de laboratório microbiológico ao manusear amostras e cultura. As precauções padrão de acordo com as diretrizes estabelecidas devem ser seguidas durante o manuseio de amostras clínicas. As diretrizes de segurança podem ser consultadas em fichas de dados de segurança individuaisLIMITAÇÕES 1.Algumas cepas podem apresentar baixo crescimento devido a variações nutricionais.2. Pode ser observada uma pequena variação na cor.DESEMPENHO E AVALIAÇÃO O desempenho do meio é esperado quando usado de acordo com as instruções no rótulo dentro da temperatura recomendada.CONTROLE DE QUALIDADE Apariência: Pó homogeneo de fluxo livre de creme a amarelo Gelificação: Firme, comparável com gel de ágar a 1,5%Cor e clareza do meio preparado:Cor vermelha, claro a ligeiramente opalescente em placas de Petri Reação:Reação de 4,9% p/v em solução aquosa a 25°C, pH: 7,1±0,2pH6,90-7,30Resposta cultural:Características culturais observadas após incubação a 30°C por 24-48 horas.ORGANISMO: Bacillus subtilis ATCC 6633 (00003*)INOCULO (UFC): 50-100CRESCIMENTO SEM ADIÇÃO DE FD003: Razoável RECUPERAÇÃO SEM ADIÇÃO DE FD003: 20-30%CRESCIMENTO COM ADIÇÃO DE FD003: Inibido RECUPERAÇÃO COM ADIÇÃO DE FD003: 0%COR DA COLÔNIA: Colônias verdes amareladas a verdes ORGANISMO: Bacillus cereus ATCC 10876INOCULO (UFC): 50-100CRESCIMENTO SEM ADIÇÃO DE FD003: Bem abundante RECUPERAÇÃO SEM ADIÇÃO DE FD003: >=50%CRESCIMENTO COM ADIÇÃO DE FD003: Bem abundante RECUPERAÇÃO COM ADIÇÃO DE FD003: >=50% COR DA COLÔNIA: colônias azuis claras, grandes e planas com centro azulORGANISMO: Bacillus thuringiensis ATCC 10792INOCULO (UFC): 50-100CRESCIMENTO SEM ADIÇÃO DE FD003: Bem abundante RECUPERAÇÃO SEM ADIÇÃO DE FD003: >=50%CRESCIMENTO COM ADIÇÃO DE FD003: Bem abundante RECUPERAÇÃO COM ADIÇÃO DE FD003: >=50%COR DA COLÔNIA: Colônias azuis claras, grandes e planas com margens irregularesORGANISMO: Bacillus megaterium ATCC 14581INOCULO (UFC): 50-100CRESCIMENTO SEM ADIÇÃO DE FD003: Bem abundante RECUPERAÇÃO SEM ADIÇÃO DE FD003: >=50%CRESCIMENTO COM ADIÇÃO DE FD003: Inibido RECUPERAÇÃO COM ADIÇÃO DE FD003: 0%COR DA COLÔNIA: Colônias mucóides amarelasORGANISMO: Bacillus coagulans ATCC 7050 (00002*)INOCULO (UFC): 50-100CRESCIMENTO SEM ADIÇÃO DE FD003: Bem abundante RECUPERAÇÃO SEM ADIÇÃO DE FD003: >=50%CRESCIMENTO COM ADIÇÃO DE FD003: InibidoRECUPERAÇÃO COM ADIÇÃO DE FD003: 0%COR DA COLÔNIA: Colônias rosadas, pequenas e elevadasORGANISMO: Bacillus pumilis ATCC 14884INOCULO (UFC): 50-100CRESCIMENTO SEM ADIÇÃO DE FD003: Bem abundanteCRESCIMENTO COM ADIÇÃO DE FD003: >=50%RECUPERAÇÃO COM ADIÇÃO DE FD003: PobreRECUPERAÇÃO COM ADIÇÃO DE FD003: 10-20%COR DA COLÔNIA: Colônias de verde claro a verdeORGANISMO: Staphylococcus aureus ATCC 25923 (00034*)INOCULO (UFC): 50-100CRESCIMENTO SEM ADIÇÃO DE FD003: Abundante RECUPERAÇÃO SEM ADIÇÃO DE FD003: >=50%CRESCIMENTO COM ADIÇÃO DE FD003: InibidoRECUPERAÇÃO COM ADIÇÃO DE FD003: 0%COR DA COLÔNIA: Colônias amarelas ORGANISMO: Enterococcus faecalis ATCC 29212 (00087*)INOCULO (UFC): 50-100CRESCIMENTO SEM ADIÇÃO DE FD003: Abuendante RECUPERAÇÃO SEM ADIÇÃO DE FD003: >=50%CRESCIMENTO COM ADIÇÃO DE FD003: Inibido RECUPERAÇÃO COM ADIÇÃO DE FD003: 0%COR DA COLÔNIA: Colônias de verde claro a verde* Números WDCM correspondentesARMAZENAMENTO E PRAZO DE VALIDADE Armazene o meio desidratado em um recipiente bem fechado e o meio preparado a 2°C - 8°C. Use antes da data de validade no rótulo.Ao abrir, o produto deve ser armazenado adequadamente seco, após tampar bem o frasco para evitar a formação de grumos devido à natureza higroscópica do produto. O armazenamento inadequado do produto pode levar à formação de grumos. Armazene em área seca e ventilada, protegida de temperaturas extremas e fontes de ignição. Feche bem o recipiente após o uso. Use antes da data de validade no rótulo. O desempenho do produto é melhor se usado dentro do prazo de validade.DESCARTE O usuário deve garantir o descarte seguro por autoclave e/ou incineração de preparações usadas ou não utilizáveis deste produto. Siga os procedimentos laboratoriais estabelecidos no descarte de materiais infecciosos e materiais que entrem em contato com amostras clínicas devem ser descontaminados e descartados de acordo com as técnicas laboratoriais atuais (6,7).REFERÊNCIAS 1.Murray P. R., Baron J. H., Pfaller M. A., Jorgensen J. H. and Yolken R. H., (Eds.), 2003, Manual of Clinical Microbiology,8th Ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C.2.Mossel D. A. A., Koopman M. J. and Jongerium E., 1967, Appl. Microb