Tripsina Liofilizada Em Pó Adequada Para Cultura Celular , 1,000-2,000 Baee Units/Mg Solid - 25 Gr - Sigma
Código: 22235
Tripsina lyophilized powder, BioReagent, suitable for cell culture, 1,000-2,000 BAEE units/mg solid
Sinônimo(s):
Cocoonase, Tryptar, Tryptase
About This Item
Número CAS:
Número da licença da enzima:
Número CE:
Número MDL:
Código UNSPSC:
12352204
NACRES:
NA.75
fonte biológica
Porcine pancreas
Nível de qualidade
linha de produto
BioReagent
forma
lyophilized powder
atividade específica
1,000-2,000 BAEE units/mg solid
peso molecular
23.8 kDa
concentração
25 mg/mL
técnica(s)
cell culture | mammalian: suitable
single cell analysis: suitable
pH
7.6
Condições de expedição
ambient
temperatura de armazenamento
−20°C
Descrição geral
A tripsina é aplicável para desagregação de tecidos devido à sua ação eficaz e tolerância em relação à neutralização induzida por soro e diferentes tipos celulares.[1]
Aplicação
A tripsina do pâncreas porcino foi usada para digerir ossos de galinha.[2] Também foi usada no isolamento de células endoteliais lúteas.[3][4][5]
Para digestão de peptídeos por tripsina, use uma proporção de cerca de 1:100 a 1:20 de tripsina:peptídeo. O uso típico deste produto é na remoção de células aderentes da superfície de uma cultura. A concentração de tripsina necessária para deslocar as células do seu substrato depende principalmente do tipo de célula e da idade da cultura. As tripsinas também foram usadas para ressuspender células durante a cultura celular, para pesquisa em proteômica para digerir proteínas e em diversas digestões em gel†. Outras aplicações incluem a avaliação da cristalização por técnicas baseadas em membranas e em um estudo para determinar que as taxas de dobramento de proteínas e a produção de proteínas podem ser limitadas pela presença de armadilhas cinéticas.
Ações bioquímicas/fisiológicas
A tripsina cliva peptídeos no lado C-terminal dos resíduos de lisina e arginina. A velocidade da hidrólise dessa reação é retardada se houver um resíduo ácido em qualquer um dos lados do sítio de clivagem e a hidrólise é interrompida se houver um resíduo de prolina no lado carboxílico do sítio de clivagem. O pH ideal para atividade da tripsina é 7-9. A tripsina pode agir também para clivar ligações de ésteres e amidas em derivados sintéticos de aminoácidos. O EDTA é adicionado às soluções de tripsina como agente quelante que neutraliza os íons de cálcio e magnésio que obstruem as ligações peptídicas nas quais a tripsina age. A remoção desses íons aumenta a atividade enzimática.
Os inibidores de protease de serina, inclusive o DFP, TLCK, APMSF, AEBSEF e a aprotinina, dentre outros, inibem a tripsina.
Componentes
A tripsina consiste em um polipeptídeo de cadeia única de 223 resíduos de aminoácidos, produzido pela remoção do hexapeptídeo N-terminal do tripsinogênio que é clivado na ligação peptídica Lis - lle. A sequência de aminoácidos tem 6 ligações cruzadas de pontes dissulfeto. Essa é a forma nativa da tripsina, a beta-tripsina. A BETA-tripsina pode ser autolisada, pela clivagem no resíduo Lis - Ser, para produzir alfa-tripsina. A tripsina é membro da família das proteases de serina.
Atenção
As soluções em HCl 1 mM são estáveis por 1 ano em alíquotas e armazenadas a -20 °C. A presença de Ca2+ também diminui a autólise de tripsina e mantém sua estabilidade em solução. A tripsina também retém a maior parte de sua atividade em ureia 2,0 M, guanidina HCl 2,0 M ou SDS 0,1% (p/v).
Definição da unidade
Uma unidade de BAEE produz um ΔA253 de 0,001 por minuto em pH 7,6 a 25 °C usando BAEE como substrato. Uma unidade de BTEE = 320 unidades de ATEE. Volume de reação = 3,2 ml (caminho óptico de 1 cm).
Nota de preparo
Esse produto é um pó liofilizado solúvel em solução salina balanceada de Hank na concnetração de 25 mg/ml.
Para aplicações que necessitam de EDTA, a solubilização da tripsina deve ser realizada com uma solução salina tamponada sem Ca2+ nem Mg2+.
